Zoonosis causada por bacterias del género Borrelia. por la transmisión
accidental por garrapatas infectadas. El género Borrelia. pertenece a la familia
Spirochateaceae, y son 4 las causales de la borreliosis de Lyme, asociadas en el
complejo Borrelia burgdorferi sensu lato ( B. burgdorferi sensu stricto,B. afzelii, B.
garinii y B. Valaisiana) La adherencia de 48 horas es el mínimo exigido, para la
inoculación de Borrelia burgdorferi sensu lato
Diagnóstico de borreliosis de Lyme: Diagnóstico directo a partir de
diferentes muestras clínicas al observarse fácilmente empleando colorantes
convencionales, Cultivo enmedio de BSK, técnicas de amplificación y la detección
mediante sondas de ADN específico.
En el diagnóstico indirecto se emplean como métodos de referencia, el
enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado y la inmunotransferencia para la
confirmación.
Objetivos:
1.- Obtener y caracterizar ixódidos procedentes de distintas áreas de la
provincia de Valencia.
2.- Determinar la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato en los ixódidos
obtenidos.
3.- Seleccionar muestras clínicas con resultado en la prueba de cribado EIA
positivo.
4.- Analizar dichas muestras mediante otras pruebas específicas y
confirmatorias así como evaluar la presencia de reactividad cruzada con otros procesos
nosológicos.
5.- Estudiar las características clínicas y evolución de los pacientes con
marcadores serológicos sugestivos de borreliosis de Lyme así como evaluar su
significación.
Materiales y métodos. Obtención y caracterización de ixódidos, se procedió a
la detección de Borrelia burgdorferi mediante estudio microscopico, cultivo y PCR. La
selección de muestras clínicas, se realizó mediante el método de cribado EIA, y el
estudio de reactividad cruzada y su confirmación mediante pruebas específicas. Y por
último, se realizó el análisis de signos y síntomas clínicos y su relación con las
resultados serológicos. Se realizaron macerados y disecciones a los que se practicó un
estudio microscópico y cultivo en BSK II.
Ya en el 2º periodo, se procedió a la detección de B. Burgdorferi mediante
técnicas de PCR. anidado, utilizando 2 parejas de iniciadores del gen de Osp A, según
el método de Guttman y colaboradores, que permiten obtener en la 2ª amplificación,
un fragmento de 345 pares de bases. Para el gen de la flagelina, utilizamos igualmene
2 parejas de iniciadores del gen de la flagelina, según el método de Lebech y
colaboradores. que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 275
pares de bases. Para el estudio serológico, se utilizó en primer lugar un método de
cribado EIA IgM-IgG Sistema VIDAS LYT (de bioMèrieux) y un método
complementario IFI Lyme Spot (también de bioMèrieux) que determina anticuerpos de
clase IgM e IgG por separado. Como método confirmatorio, se utilizó la
inmunotransferencia B. burgdorferi cepa B31 (de MarDx Diagnostic) y · B. garinii
genogrupo 2 (de Gull Laboratories). La reactividad serológica cruzada, se llevó a cabo
frente a Treponema pallidum, Coxiella burnetii, Rickettsia conori y Brucella mellitensis,
virus de Epstein-Barr, Citomegalovirus y virus de la inmunodeficiencia humana. La
población de pacientes se correspondió con los atendidos en el área del HGUV
Conclusiones:
1.-La colección e identificación de garrapatas ixódidas procedentes de
diferentes áreas de la provincia de Valencia, ha revelado la existencia de cinco
géneros, con siete especies distintas. Ninguno de ellos, clasificado como Ixodes ricinus,
reconocido principal vector de la borreliosis de Lyme.
2.-En ninguna de las garrapatas estudiadas se ha identificado una espiroqueta
compatible con Borrelia burdorferi sl. u otra especie de Borrelia asociada a un cuadro
de borreliosis de Lyme.
3.-Consideramos que el método más adecuado para el estudio microbiológico
en los ixódidos, es la disección de las garrapatas con extracción de sus estructuras
glandulares e intestinos medios. El uso de ejemplares macerados para detección por
métodos moleculares es desaconsejado por la probable inhibición de la amplificación
del ADN específico.
4.-El método de enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado, selecciona una
población de pacientes con características clínicas muy variables, pero también un
grupo de pacientes con manifestaciones características y con una concreta evolución
clínica, que sustentan la existencia de casos probables de borreliosis de Lyme.
5.-La titulación de los anticuerpos específicos de clase IgM e IgG mediante
inmunofluorescencia y los criterios establecidos para la interpretación de las pruebas
confirmatorias de inmunotransferencia con antígenos de B. burgdorferi y B. garinii, se
muestran escasamente rentables en nuestro medio, ya que no permiten confirmar ni
descartar la existencia de la enfermedad en el grupo de pacientes estudiados.
Todo lo cual nos permite considerar la necesidad de un mejor estudio
epidemiológico y clínico de los casos sospechosos de borreliosis de Lyme, y
particularmente el desarrollo de criterios de diagnóstico microbiológico que se adecuen
al perfil de la enfermedad en nuestra área.

Zoonosis caused by bacteria of the genre Borrelia. by the accidental
transmission by infected ticks. The genre Borrelia. concerns to the family
Spirochateaceae, and they are 4 the grounds of Lyme's borreliosis, associated in the
complex broad Borrelia burgdorferi sensu (B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii, B.
garinii and B. Valaisiana) The adherence of 48 hours is the demanded minimum, for
the inoculation of Borrelia burgdorferi sensu lato.
Diagnostic of the Lyme borreliosis: Direcly diasnostic by detection of spirochaeta
with the uses of the clinical specimens (skin biopsies, CSF semple, peripheral blood,
etc.) of patients whith conventional laboratory tintions is relative easy to reconized.
Culture of the organism in BSK medium, molecular characterization of Borrelia isolates
by gene sequences from DNAs amplified (flagellin (flaB), and outer surface protein A
(ospA)) from ticks or patiens confirmed the presence of several Borrelia species.
In the indirect diagnosis use as methods of reference, the
enzimoinmunoanálisis as test of screening and the inmunotransferencia for the
confirmation
Objetivos:
1.- Recolection and caracterization of ixodid ticks from diferent areas of
Valencia countri.
2.- Investigated la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato in these ixode
ticks recolected.,
3.-To select clinical samples with result in the test of screening positive EIA.
4.-To analyze the above mentioned samples by means of other specific and
confirmatory tests(proofs) as well as to evaluate the presence of cross-reactivity with
other processes nosológicos.
5.-To study the clinical characteristics and evolution of the patients with
serologic results suggestive of borreliosis of Lyme as well as to evaluate his
significance.
Materials and methods: Obtaining and characterization of ixodids, one proceeded to
the detection of Borrelia burgdorferi by means of microscopic study, culture and PCR.
The selection of clinical samples, it was realized by means of the method EIA, and the
study of crossed reactivity and his confirmation by means of specific tests. And finally,
there was realized the analysis of signs and clinical symptoms and his relation with
results serológicos. There were realized softened and dissections those who a
microscopic study was practised and culture in BSK II.
In the 2º periode, we made a molecular characterization of B. Burgdorferi from
ticks by gene sequences DNAs amplified (nexteed PCR using 2 primers of gen of outer
surface protein A (OspA), by el Guttman' metode et all that permeted the obtention in
the 2ª amplification, a fragment of 345 pairs of bases. By the flagelina, gene, we
using too 2 pairs of primers of the flagelin gene, by the Lebech metode et al. That
allow to obtain in 2 ª amplification, a fragment of 275 bases pair. For the serologic
study, there was in use first a method of sifted EIA IgM-IgG System VIDAS LYT (of
bioMèrieux) and a complementary method IFI Lyme Spot (also of bioMèrieux) that
determines antibodies of class IgM and IgG separately. As confirmatory method, there
was in use the inmunotransferencia B. burgdorferi B31 (of MarDx Diagnostic) and B.
garinii genogrupo 2 (of Gull Laboratories).
The serologic cross reactivity, whith Treponema pallidum, Coxiella burnetii,
Rickettsia conori and Brucella mellitensis, Epstein-Barr virus, Citomegalovirus virus and
AIDS virus. The population of patients corresponded(fitted) with the attended ones in
the area of the HGUV.
Conclusiones:
1.-The collection and identification of ixodid ticks proceeding from different
areas of the province of Valencia, it has revealed the existence of five genres, with
seven different species. None of them, classified as Ixodes ricinus, recognized principal
vector of Lyme's borreliosis.
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2.-En none of the studied ticks has been identified an espiroqueta compatible
with Borrelia burdorferi sl. or another Borrelia's species associated with borreliosis of
Lyme disease.
3.-We considered that the method most adapted for the microbiological study in
the ixodid, is the ticks dissection with extraction of its glandular structures and medium
intestines. The use of specimens softened for detection for molecular methods is
dissuaded by the probable inhibition of the amplification of the specific ADN
4.-The enzimoinmunoanálisis method of as screening test, a population of
patients selects with clinical very changeable characteristics, but also a group of
patients with typical manifestations and with a concrete clinical evolution, which they
sustain the existence of probable cases of borreliosis of Lyme.
5.-La qualifications of the specific antibodies of class IgM and IgG by means of
inmunofluorescencia and the criteria established for the interpretation of the
confirmatory tests of inmunotransferencia with B. burgdorferi antigens and B. garinii,
prove to be scantily profitable in our way, since they allow neither confirm nor to
discard the existence of the disease in the group of studied patients.
Allows to consider the need of a better epidemiological and clinical study of the
suspicious cases of borreliosis of Lyme, and particularly the development of criteria of
microbiological diagnosis us that they serve to the profile of the disease in our area.