Estimació de la incertesa de mesura dels procediments de referència primaris per a la mesura de la concentració catalítica dels enzims en un laboratori de referència

Author

Rami Brualla, Laura

Director

Canalias Reverter, Francesca

Date of defense

2013-02-25

ISBN

9788449036682

Legal Deposit

B-17833-2013

Pages

213 p.



Department/Institute

Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Bioquímica i Biologia Molecular

Abstract

Aquest treball s’ha realitzat al Laboratori de Referència d’Enzimologia Clínica (LREC) de la Unitat de Bioquímica de Medicina. El LREC és un laboratori de referència acreditat per les normes ISO 17025 i ISO 15195, i forma part de la xarxa internacional de laboratoris de referència del Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine (JCTLM). Un dels requisits dels laboratoris de referència es conèixer la contribució de les diferents fonts d’incertesa a la incertesa de mesura, el que es coneix amb el nom de “compilació de la incertesa”. L’objectiu d’aquest treball és l’estimació de la incertesa de mesura, mitjançant un estudi de compilació de la incertesa, de dos procediments de mesura de referència primaris: - el procediment de referència primari per la mesura de l’enzim γ-glutamil transferasa (GGT), com a exemple de procediment amb una única reacció. - el procediment de referència primari per la mesura de l’enzim creatina cinasa (CK), com a exemple de procediment amb més d’una reacció. El càlcul de la incertesa s’ha realitzat a partir dels documents “Evaluation of measurement data – Guide to the expresion of uncertainty”, més conegut com GUM i desenvolupat pel Joint Committee for Guides in Metrology (JCGM), i “Quantifying uncertainty in analytical measurement”, recomanat per l’Eurachem. Això va implicar fer un estudi exhaustiu dels procediments de mesura de referència, que va consistir en els següents passos: a) definir el mesurant; b) identificar totes les possibles fonts d’incertesa; c) calcular la incertesa estàndard de cada font, mitjançant una avaluació de tipus A o de tipus B, d) calcular els coeficients de sensibilitat, els quals descriuen com varia el resultat del mesurant al produir canvis en cadascuna de les fonts de incertesa; e) calcular la incertesa combinada, tenint en compte la presència o no de fonts correlacionades i f) calcular la incertesa expandida amb un nivell de confiança d’aproximadament el 95 %. El valor de la incertesa de mesura estimada per el procediment de mesura de la GGT és d’un 2,2 % amb un factor de cobertura (k) de 2. De totes les fonts d’incertesa estudiades únicament 8 han contribuït a la incertesa de mesura. Aquestes fonts d’incertesa, ordenades per la importància en la contribució, són: la variabilitat expressada com la imprecisió en condicions intermèdies de mesura amb un 35,6 %, l’interferent glicina amb un 22,8 %, l’exactitud de les absorbàncies amb un 17,1 %, la longitud d’ona amb un 12,4 %, el pH amb un 8,61 %, la linealitat amb un 1,60 %, la fracció de volum de mostra amb un 1,18 %, i la temperatura amb un 0,68 %. La incertesa de mesura estimada del procediment de mesura de la CK és d’1,9 % (k=2). Les principals fonts d’incertesa amb una contribució significativa a la incertesa de mesura són: la variabilitat expressada com la imprecisió en condicions intermèdies de mesura amb un 50,1 %, l’exactitud de les absorbàncies amb un 23,2 %, el pH amb un 22,4 %, la fracció de volum de mostra amb un 2,16 %, la temperatura amb un 1,35 %, la longitud d’ona amb un 0,37 % i la linealitat amb un 0,34 %.


This work has been carried out in the Laboratori de Referència d’Enzimologia Clinica (LREC) from de biochemistry and molecular biology department of the Universitat Autònoma de Barcelona (UAB). The LREC is a reference laboratory that is accredited for the ISO 17025 and ISO 15195 standards, and also it is part of the international network of references laboratories of the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine (JCTLM). One of the requirements of the reference laboratories is to know the contribution of the different sources of uncertainty to the measurement uncertainty, the so called “uncertainty budget”. The aim of this work is the estimation of the measurement uncertainty, through an uncertainty budget study, of two primary reference measurement procedures: - the primary reference procedure for the measurement of the catalytic concentration of γ-glutamyltransferase (GGT), as an example of procedure with one reaction. - the primary reference procedure for the measurement of catalytic concentration of creatine kinase (CK), as an example of procedure with different reactions. The calculation of the uncertainty has been based on the documents "Evaluation of measurement data - Guide to the expression of uncertainty," which is known as GUM and was developed by the Joint Committee for Guides in Metrology (JCGM), and "Quantifying uncertainty in analytical measurement ", which is recommended by the Eurachem. So for the uncertainty estimation a comprehensive study of the reference measurement procedures was done. This study consisted of the following steps: a) definition of the measurand; b) identification of all possible sources of uncertainty; c) quantification of the standard uncertainty of each potential source of uncertainty identified, with a type A or type B evaluation; d) calculation of sensitivity coefficient, which describe how the value of the measurand varies with changes in each sources of uncertainty; e) calculation of combined uncertainty considering the presence or not of correlated sources of uncertainty, and f) calculation of expanded uncertainty with a level of confidence of approximately 95 %. The value of the measurement uncertainty estimated for the measurement procedure of GGT is 2,2 % with a coverage factor (k) of 2. From all the sources of uncertainty identified only 8 have contributed to the measurement uncertainty. This sources of uncertainty, ordered by importance in the contribution, are the following: the variability expressed as imprecision in intermediated conditions with a 35,6 %, the inhibition by glycine with a 22,8 %, the absorbance accuracy with a 17,1 %, the wavelength adjustment with a 12,4 %, the pH with a 8,61 %, the linearity with a 1,60 %, the sample volume fraction with a 1,18 % and the temperature with a 0,68 %. The measurement uncertainty estimated for the measurement procedure of CK is 1,9 % (k = 2). The main sources of uncertainty with a significant contribution to the measurement uncertainty are: the variability expressed as imprecision in intermediated conditions with a 50,1 %, the absorbance accuracy with a 23,2 %, the pH with a 22,4 %, the sample volume fraction with a 2,16 %, the temperature with a 1,35 %, the wavelength adjustment with a 0,37 % and the linearity with 0,34 %.

Keywords

Incertesa; Concentració catalítica; Procediments de Mesura

Subjects

57 - Biological sciences in general

Knowledge Area

Ciències de la Salut

Documents

lrb1de1.pdf

1.281Mb

 

Rights

ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi queda condicionat a l'acceptació de les condicions d'ús establertes per la següent llicència Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es/

This item appears in the following Collection(s)